MÓDULO 3 – AULA 6
Preparo de Meios de Cultura

Nesta aula, serão dados detalhes dos processos necessários para a produção de meios de cultura e principais equipamentos utilizados.

Sistemas de Esterilização por filtração
A filtração é um procedimento utilizado para a esterilização dos meios de cultura. Filtração é a remoção de partículas sólidas de um fluido pela passagem desse fluido através de um meio filtrante, no qual os sólidos são depositados.

Filtração por pressão diferencial
O movimento da fase fluida através do meio filtrante se dá devido a um diferencial de pressão. Para a pressão diferencial são utilizadas membranas especiais, de um material chamado de difluoreto de polivinilideno (PVDF) que consistem em um plástico especial que apresenta resistência e pureza. Essa membrana possui poros com 0,22 micrômetros e esse processo é indicado para filtração de volumes pequenos porque pode ser realizado em seringas.

Filtração a vácuo
Também se utiliza da membrana de PVDF com poros de 0,22 micrometros e para esse tipo de filtração podem ser filtrados volumes maiores.

Etapas do preparo de meio de cultivo
Pesagem de reagentes
De acordo com o tipo de meio de cultivo, pode ser necessária a adição de componentes em pó, normalmente o bicarbonato de sódio e o HEPES são pesados e utilizados de acordo com as instruções do fabricante do meio.

Solubilização e verificação do pH
O bicarbonato de sódio e o HEPES após pesagem são acondicionados dentro de um recipiente, juntamente com o meio de cultura em pó, que já vem aliquotado do fabricante. Após esse acondicionamento, completar com água ultrapura estéril até o volume indicado pelo fabricante. Solubilizar a solução sob agitação.

Filtração
A filtração da solução é realizada dentro da cabine de segurança biológica para garantir a esterilidade dessa solução, com auxílio da bomba de vácuo.

Acondicionamento e rotulagem
Após a filtração, a solução é acondicionada, deverá ser acondicionada em frascos de vidro estéreis e rotulados. As informações que devem conter no rótulo são: denominação do produto, exemplo, data da produção, responsável, validade, condições de acondicionamento e lote da solução. As soluções devem ser acondicionadas de acordo com a temperatura indicada.
Importante: O laboratório deve possuir vidrarias estéreis exclusivas para a cultura celular, isso garante a manutenção da qualidade da solução e todo o material descartável utilizado, deverá ser livre de endotoxinas e pirogênios, DNase e RNase.

Registros
Além da rotulagem, deve-se registrar no caderno ou formulário de registros a denominação do meio de cultura, a data de produção, o responsável pela produção, número do lote, validade e fabricante do meio de cultura, suplementos e filtros utilizados, número do lote da solução produzida, água utilizada, pH, equipamentos utilizados e identificação dos equipamentos utilizados, preferencialmente, número de patrimônio.

Saiba mais em conteúdos do curso: Nos módulos de estrutura laboratorial e equipamentos e no módulo de técnicas básicas é possível conhecer mais caracteristicas dos equipamentos utilizados além de assistir videoaulas sobre preparo de meio por filtração.

 

Para saber sobre esse tema assista a nossa videoaula e acesse o texto da transcrição: