Módulo 5TÉCNICAS BÁSICAS DE CULTIVO CELULAR
MÓDULO 5 – AULA 2
Preparo de meio de cultivo
O preparo de meios de cultivo e soluções estéreis é fundamental para o cultivo celular. A primeira etapa do procedimento é justamente a organização de equipamentos, materiais e reagentes necessários, que vão variar de acordo com o meio de cultivo ou solução a ser preparada.
A segunda etapa consiste na pesagem de reagentes quando indicado, solubilização, ajuste de pH, que salvo recomendações específicas deve ficar em torno de pH 7,2, e ajuste do volume final da solução ou meio de cultivo. Essas etapas podem ser realizadas em ambiente adequado, a fim de evitar introdução de contaminação.
A terceira etapa é realizada em cabine de segurança biológica, onde no exemplo de nossa vídeo-aula, será realizada a esterilização por filtração. Já com a cabine de segurança biológica preparada, todos os materiais necessários são colocados na cabine de segurança biológica, incluindo o filtro de esterilização e o frasco estéril e realiza-se o procedimento de filtração, que deve ser realizado com todo o cuidado necessário para evitar contaminação. É possível realizar testes para avaliação da esterilidade do meio de cultivo ou solução. Deve-se seguir o registro das informações do preparo do meio de cultivo ou solução estéril, buscado conferir rastreabilidade aos procedimentos realizados.
Preparo de Meio de Cultivo. Visão esquemática das etapas usuais para preparo de meio de cultivo. Adaptado de Freshney, 2010 Fonte: Criado em BioRender. Melo de Aguiar, A. & Souza, A, C, G. Bárizon, M.J. (2025) https://BioRender.com/w76r177 Sob licença CC-BY 4.0 (https://creativecommons.org/licenses/by/4.0/). Descrição estendida da legenda: A imagem apresenta um fluxograma descrevendo as etapas para o preparo de meio de cultivo celular, com ilustrações e descrições para cada fase do processo: 1) Pesagem dos reagentes: Organização de equipamentos e pesagem dos reagentes conforme o meio de cultivo a ser preparado; 2) Dissolução dos reagentes: Adição dos componentes ao béquer com água ultrapura e meio comercial em pó, contendo aminoácidos, sais minerais e vitaminas; 3) Solubilização: Agitação da solução em misturador magnético até dissolução completa dos componentes. 4) Ajuste do pH: Medição do pH e ajuste para aproximadamente 7,2; 5) Transferência para cabine de segurança: Transporte dos reagentes e meio preparado para a cabine de segurança biológica para esterilização; 6) Esterilização por filtração: Uso de sistema de filtração com membrana de 0,22 µm e bomba de vácuo para garantir a esterilidade do meio; 7) Armazenamento: Transferência do meio filtrado para garrafa estéril e realização de testes de esterilidade antes do uso; 8) Registros: Documentação do processo para rastreabilidade. Ao final do processo, o meio pode ser suplementado conforme as necessidades experimentais e do tipo celular utilizado.
Para saber sobre esse tema, assista a nossa videoaula e acesse o texto da transcrição:
Saiba mais em conteúdos do curso: No módulo de meio de cultivo e substratos celulares é possível ver as características de meios de cultivo e os principais equipamentos utilizados, que também podem ser acessados no módulo de estrutura de laboratório s e equipamentos.
