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Módulo 6 | 4 Aulas Boas práticas e controle de qualidade em laboratórios de cultivo celular

MÓDULO 6 – AULA 4
Principais fontes de contaminação e como evitá-las

Introdução

Conforme vimos em aulas anteriores, as contaminações microbianas e as contaminações cruzadas são o principal problema associado à falta de reprodutibilidade dos resultados obtidos por cultivos celulares. O quadro abaixo destaca as principais fontes de contaminação e como evitá-las. Contudo treinamento adequado aliado ao uso de procedimentos padronizados e registros são medidas gerais que visam evitar quaisquer tipos de contaminação

Tipo de Contaminação

Como Ocorre?

Como Evitar?

Contaminação cruzada entre linhagens celulares distintas

● Mistura de linhagens por fonte duvidosa
● Manipulação inadequada

● Obter células de fontes confiáveis (bancos de células);
● Identificar adequadamente frascos e tubos;
● Usar meios e soluções separadas por linhagem;
● Evitar manipular linhagens diferentes simultaneamente;
● Limpar a cabine e esperar 15-20 minutos entre manipulações de linhagens distintas.

Identificação errada de linhagem celular

● Má rotulagem
● Ausência de autenticação da linhagem
● Falta de rastreabilidade

● Obter células de fontes confiáveis (bancos de células);
● Identificar adequadamente frascos de cultura e criotubos;
● Realizar testes de autenticação: cariótipo, perfil de isoenzimas ou marcadores específicos; manter registros detalhados das linhagens utilizadas.

Contaminação microbiana

● Introdução de bactérias, fungos, leveduras, fungos filamentosos e micoplasmas por insumos, ambiente ou manipulação.

● Manter técnica asséptica rigorosa;
● Realizar manutenção periódica de cabines de segurança e equipamentos;
● Monitorar a contaminação com métodos como PCR, coloração de DNA (DAPI) ou kits comerciais;
● Evitar uso rotineiro de antibióticos para detectar problemas rapidamente.
● Manter o laboratório limpo e organizado

Micoplasma

● Contaminação difícil de detectar, não visível ao microscópio comum, com origem bovina ou suína.

● Realizar monitoramento regular com PCR, coloração de DNA (DAPI) ou kits comerciais;
● Evitar insumos contaminados;
● Seguir boas práticas de manipulação e esterilização

Contaminação por insumos

●  Insumos contaminados, como meios de cultura, tripsina ou soro.

●  Comprar insumos de fornecedores confiáveis;
● Testar esterilidade de insumos antes do uso;
●  Usar ensaios moleculares e bioquímicos para verificar contaminantes.

Contaminação por equipamentos

● Uso inadequado ou manutenção deficiente de equipamentos, como cabines de segurança.

●  Operar cabines de segurança corretamente;
● Treinar operadores;
● Realizar manutenção regular dos equipamentos;
● Manter áreas de trabalho limpas e organizadas.

Contaminação ambiental

●Poeira
● Presença de caixas e papéis no laboratório,
● Falta de controle de insetos e vetores.

●Garantir limpeza frequente do ambiente;
● Evitar acúmulo de materiais desnecessários;
● controlar vetores e garantir organização do espaço de trabalho.

Contaminação por técnica inadequada

Erros na manipulação, como falhas na troca de meios ou no repique celular.

●  Treinar operadores em boas práticas de cultivo;
●  Manter limpeza entre manipulações;
●  Revisar protocolos frequentemente e monitorar a eficácia das técnicas.

Fonte: Adaptado de Freshney, 2010.

Adicionalmente, a organização e manipulação correta da cabine de segurança biológica é crucial para a boa técnica asséptica e evitar contaminações.

Comparação entre uma cabine de segurança biológica organizada (A) e desorganizada (B), destacando a importância da técnica asséptica.

Organização da Cabine de segurança biológica (CSB). A CSB bem-organizada é fundamental para boa técnica asséptica e previne contaminações (A). Ao contrário, uma CSB desorganizada, com a saída de ar obstruída, propicia a ocorrência de contaminações. Adaptado de Freshney, 2010. Fonte: Erich, N.M. e Aguiar, A.M. (2025). Descrição estendida da legenda: A imagem mostra duas condições distintas de organização dentro de uma cabine de segurança biológica (CSB) utilizada para cultivo celular. Imagem A: A CSB está bem-organizada, com poucos itens essenciais distribuídos de forma lógica e funcional. Os materiais de uso estão posicionados para facilitar o trabalho do operador sem obstruir a saída de ar. A disposição adequada previne a contaminação e melhora a eficiência do trabalho. Imagem B: A CSB está desorganizada, com muitos itens distribuídos de maneira caótica. Há diversos materiais acumulados, como frascos, pipetas, tubos e sacos plásticos. A obstrução da saída de ar pode interferir na barreira de proteção, aumentando o risco de contaminação dos experimentos. Essa comparação destaca a importância da organização para a segurança biológica, prevenindo contaminações e garantindo a confiabilidade dos experimentos em laboratórios de cultura celular.  

 

Para saber sobre esse tema assista a nossa videoaula e acesse o texto da transcrição:

 

 


 

Saiba mais em conteúdos do curso: No módulo de estrutura laboratorial e equipamentos e no módulo de práticas é possível conhecer mais caracteristicas dos equipamentos e procedimentos e uso da cabine de segurança biológica.

Quer saber mais detalhes sobre esse tema?
O conteúdo da dissertação de mestrado da autora é correlacionado diretamente ao tema da aula, acesse:

KULIGOVSKI, Crisciele. Estabelecimento de banco de linhagens celulares aplicadas a pesquisa científica e ensaios toxicológicos in vitro. 2020. Dissertação (Mestrado em Engenharia Biomédica) – Universidade Tecnológica Federal do Paraná, Curitiba, 2020. Disponível em: http://repositorio.utfpr.edu.br/jspui/handle/1/24680. Acesso em 07/05/2021
Para se aprofundar em:
Manutenção da integridade do sistema teste (cultivo celular)
Criopreservação
Caracterização celular
Pureza celular
Contaminação microbiana
Contaminação por micoplasma
Viabilidade celular

E muito mais!

 

 

 

Vamos testar seus conhecimentos no tema desse módulo?
Confira uma pergunta por vez

Quanto as vertentes principais associadas à boas práticas de cultivo celular?

  • A) Gerencial e Laboratorial

  • B) Identificação de contaminantes e uso correto de equipamentos



Qual a contaminação de cultivos celulares que passa de forma desapercebida, na maioria das vezes

  • A) Fungos

  • B) Micoplasmas

 

 

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